生工质粒提取试剂盒

生工质粒提取试剂盒 一般试剂盒提取质粒浓度大概是多少?

提质粒试剂盒大中小有什么区别?

一般试剂盒提取质粒浓度大概是多少?

区别:1、所需菌液不同。大提用于大量菌液的提取,100ml-500ml 均可,而小提用的菌液量很少,一般1.5-5ml。2、纯度不同。一般试剂盒中大提比小提多了溶菌酶、异丙醇(回收沉淀核酸)、含一定量PEG的氯化物(回收质粒DNA)及乙酸铵等,其作用及目的都是有利于细菌的裂解和质粒的纯化,所以大提的产物比小提的量多很多,而且纯度很高。3、实验要求不同。小提一般用于质粒鉴定和对纯度要求不是很高的实验,大提用于质粒的大量提取和转染等纯度要求很高的实验。

质粒提取的注意事项?

1、利用氯霉素抑制染色体的复制,而不抑制质粒的复制这一特点,在低拷贝质粒(如pUC19)的培养过程中添加氯霉素可以大大提高得率。

2、RNA 的去除,首先是使用 RNase 消化。在溶液 I 中加入高浓度的 RNase A (100ug/ml),或者用含 25ug RNase A/ml TE 溶解抽提好的质粒,都可以降低 RNA 残留,但都不能彻底去除。

3、蛋白质的去除,主要是靠不溶解的 K-SDS-蛋白质复合物的形成。虽然将中和后的体系置于 4C 一段时间,可以形成更多的该不溶复合物,从而使蛋白质残留更少,但实践证明这样做并不是必须的,除非是大量抽提。 首先,质粒的提取可分为质粒小提、质粒中提、质粒大提。目前大多数实验室都选用试剂盒进行提取,可以根据实验的不同需求,选择相应的试剂盒。 质粒小提主要用于用于大肠杆菌中质粒DNA的小量提取,获得的质粒可以用于常规的载体构建,一般适用于5ml以下菌液。 而质粒中提,在小提的基础上可以进一步去除菌液中的内毒素,获得的质粒可以用于细胞转染,常规需要菌液量为10-15ml。质粒大提与中提方法相同,可一次抽提100ml-300ml菌液获得大量质粒。